高爾基染色(包含掃描)信帆生物給您一步到位Golgi-Cox浸染法是研究神經元和膠質細胞正常和非正常形態*有效的方法。使用Golgi技術,在藥物處理過的動物腦中和因神經疾病死亡的病人腦中發現了神經樹突和樹突微小的形態改變。
實驗流程:
組織固定-組織塊整體染色-脫水-切片封片-顯微鏡鏡檢
結果判讀:
神經元細胞、膠質細胞、神經樹突棘呈黑色,背景淡黑色或無色
送樣運輸要求:
樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運輸送樣。
切勿固定時間過長,切勿冷凍結冰。
實驗步驟
明膠硫酸鉻鉀混合液(放置4℃條件下可保存3個月)
明膠玻片制作:將明膠硫酸鉻鉀混合液至于37℃加熱呈液體狀(不能搖動該溶液,溶液中若形成小氣泡,后續制片過程中會造成玻片上殘留有很多小顆粒),普片浸入該液體幾秒后拿出,置于鐵架上于37℃烤箱烘干即可,干燥陰涼通風處保存。
1、取材:將老鼠殺死后,立刻取腦組織置于固定液中固定48h以上。
2、高爾基染色:根據需要觀察的組織部位將大鼠腦組織切成2-3mm厚的組織塊,用生理鹽水將腦組織輕輕漂洗幾遍,置于45ml的圓底EP管中,加入高爾基染液將腦組織完全浸沒,放置陰涼通風處避光處理14天(浸泡48h后,換一次新染液,之后每隔3天換一次新染液,共計14天)。
3、組織處理:蒸餾水浸洗3次,倒入80%的冰醋酸浸沒組織,過夜,待組織變軟后蒸餾水洗,置于30%的蔗糖中。
4、切片:用振蕩切片機將組織切成100微米,貼在明膠玻片上,過夜避光晾干。
5、顯影定影:將晾干后的組織玻片以濃氨水處理15min,蒸餾水洗1min,酸性堅膜定影液處理15min,蒸餾水洗3min,晾干,甘油明膠封片。
6、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析;可用數字切片掃描儀全景多層掃描得到腦組織全景圖像。
結果判讀:
神經元呈黑色,膠質細胞呈黑色,背景灰白色或無色。
注意事項:
1、高爾基染液有劇毒,需要穿戴實驗服和一次性手套操作實驗;
2、染色過程中的每一步都需要嚴格避光。
3、高爾基染液放置陰涼通風避光處常溫保存即可;定影液18℃-20℃避光通風處保存。